Mario está de volta com um novo jogo, estilo ao Super Mario 64. Ao chegar à ilha de Delfino para desfrutar férias mais do que merecidas, Mario se encontra sobre observação pelos habitantes locais. Aparentemente alguém vestido igual ao Mario vem poluindo a ilha com uma substância esquisita, então a cidade sentencia o encanador italiano a limpar toda a sujeira. Mario não tem só que limpar a cidade, mas também tem que limpar a sua reputação encontrando o misterioso responsável por toda a sujeira.
Para combater este novo problema, Mario vem equipado com um canhão de água nas costas para ajudar a limpar o piche, removendo alguns grafites e as melecas da cidade, Mario irá revelar novas áreas para explorar e também para limpar é claro. Cada nova região é acessada por um portal que fica na cidade de Delfino, que funcionam de uma maneira bem parecida com os quadros e pinturas do Castelo de Super Mario 64. Para ativar os portais, Mario tem que coletar certo número de “shines”,sóis dourados que funcionam igual as estrelas em Super Mario 64. “shines” são ganhos resolvendo quebra-cabeças, derrotando chefes ou simplesmente encontrando-os em alguma fase. Apenas encontrando “shines” o suficiente, é que Mario pode salvar o mundo da catástrofe criada pelo seu clone.
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